凝胶成像仪怎么用

凝胶成像即对DNA或RNA胶进行切胶、拍照、观察、分析的实验室类仪器,凝胶成像系统可以应用于分子量计算、密度扫描、密度定量、PCR定量等生物工程常规研究。凝胶成像系统的基本骨包含:CCD相机,暗室和分析软件

样品在电泳凝胶或者其他载体上的迁移率不一样,以标准品或者其他的替代标准品相比较就会对未知样品作一个定性分析。这个就是图像分析系统定性的基础。根据未知样品在图谱中的位置可以对其作定性分析,就可以确定它的成份和性质。

样品对投射或者反射光有部分的吸收,从而照相所得到的图像上面的样品条带的光密度就会有差异。光密度于样品的浓度或者质量成线性关系。根据未知样品的光密度,通过于已知浓度的样品条带的光密度指相比较就可以得到未知样品的浓度或者质量。这就是图像分析系统定量的基础。采用最新技术的紫外透射光源和白光透射光源使光的分布更加均匀,最大限度的消除了光密度不均造成的对结果的影响。

凝胶成像仪怎么用

凝胶成像种类

1.普通凝胶成像分析系统:可以对蛋白电泳凝胶,DNA凝胶样品进行图象采集并进行定性和定量分析,样品包括:EB、SYBR Green、SYBR Gold、Texas Red、GelStar、Fluoroscecin、 Radiant Red等染色的核酸监测;以及Coomassie Blue、SYPRO Orange、各种染色的蛋白质凝胶如考染等。(或UV,EB和有色及可见www.58yuanyou.com样品成像);

2.化学发光成像分析系统:成像范围涵盖UV,EB,化学发光、紫外-荧光、有色及可见样品成像;

3.多色荧光成像分析系统:成像范围涵盖UV,EB,化学发光、多色荧光荧光、有色及可见样品

4.多功能活体成像分析系统:UV,EB,化学发光、多色荧光荧光、有色及可见样品成像和www.58yuanyou.com离体组织和小型动物,及大型型动物。

凝胶成像选购要点

凝胶成像系统包括成像系统和分析凝胶图片的软件系统。在选购时需要分别从这两个部分来考察凝胶成像系统的功能参数。

如果您主要用它来拍普通核酸胶或蛋白胶,那么几乎市场上所有的成像仪都可以很好的满足您的需求。这时除了价格这个决定因素外,能比较的也就是一些操作是否简便等不太重要的指标了。

但是对于准备做化学发光的用户,他们需要对敏感度要求高,同时还要求比较宽的动态范围。因为要想捕获到微弱的化学发光,需要上佳的CCD相机和镜头

一般来说,CCD相机的冷却温度和背景噪音息息相关,温度越低,噪音就越低。因此,-25℃的绝对制冷温度是对相机的第一个要求(更低的温度,噪音降低效果不明显,而量子效率又会受很大影响);另外,较大的像素能够提供更高的捕光效率;所以对于相同大小的CCD芯片,需要注意像素的尺寸

镜头的参数就简单了,由于我们只需要观察近距离的样品,而且一般可以调整样品位置(有些厂家甚至提供电动样品升降平台),所以基本无需选择长镜头或者变焦镜头;但是,由于我们需要检测微弱的化学发光,镜头的光圈则至关重要,一般F值越小,其通光量越大,而且成平方反比关系,因此我们一般需要选择光圈F值尽量小的镜头。另外,如果镜头是电动的,我们可以省却打开机箱,反复手工调整光圈和聚焦等的烦恼。

其他我们需要考虑的包括光源、滤光片和暗箱等部件。光源的种类和发光的均一度,滤光片的数量和暗箱的遮光效果等均在我们的考虑范围之内。当然,一般如果成像仪的CCD和镜头配置不错,一般这些部件也不会太差。

凝胶成像仪怎么用

在选择凝胶成像系统时,我们关原由网注的问题通常有以下一些方面:

1、像素越高是不是成像更清晰,产品就越好?

像素是要针对成像设备来看的,其实CCD本身的质量比单纯的像素高低更重要。对于同级别CCD来说,最重要的指标是CCD的尺寸大小,尺寸越大其本身价值就成几何倍地增长。

2. CCD和CMOS有什么区别,哪种芯片更好?

CCD和CMOS在制造上的主要区别是CCD是集成在半导体单晶材料上,而CMOS是集成在被称做金属氧化物的半导体材料上。

从原理上,CMOS的信号是以点为单位的电荷信号,而CCD是以行为单位的电流信号,前者更为敏感,速度也更快,更为省电。

但CCD制造工艺较复杂,采用CCD的摄像头价格都会相对比较贵。事实上经过技术改造,目前CCD和CMOS的实际效果的差距已经减小了不少。而且CMOS的制造成本和功耗都要低于CCD不少,所以很多摄像头生产厂商采用的CMOS感光元件。

在成像方面,相同像素下CCD的成像通透性、明锐度都很好,色彩还原、曝光可以保证基本准确。而CMOS的产品往往通透性一般,对实物的色彩还原能力偏弱,曝光也都不太好,由于自身物理特性的原因,CMOS的成像质量和CCD还是有一定距离的。但由于CMOS低廉的价格以及高度的整合性,因此在摄像头领域还是得到了广泛的应用。

现在高级的CMOS并不比一般CCD差,但是CMOS工艺还不是十分成熟,普通的CMOS 一般分辨率低而成像较差。

目前的情况是,许多低档入门型的数码相机使用廉价的低档CMOS芯片,成像质量比较差。普及型、高级型及专业型数码相机使用不同档次的CCD,个别专业型或准专业型数码相机使用高级的CMOS芯片。代表成像技术未来发展的X3芯片实际也是一种CMOS芯片。

CCD与CMOS孰优孰劣不能一概而论,但一般而言,普及型的数码相机中使用CCD芯片的成像质量要好一些。

3、如何看待CCD的一些主要技术参数?

CCD的主要技术参数有CCD尺寸,有效像素,信噪比,采集位数等。其中CCD尺寸与信噪比都是影响成像的关键因素,尺寸越大能接受的信号就越多。而热噪音越低,信噪比就越高,成像质量也就越好。采集位数指色彩灰度的表达范围。如采集位数为8则表示有2的8次方数量的灰度来还原色彩。

4.什么是分辨率,EcmnUBIp它与像素值有什么关系?

分辨率的大小和像素值是分不开的,像素值是指CCD能分辨到的最小的感光元件,我们平时说的多少万像素就是这些感光元件的个数了。

所以一般来讲像素越多,成像也就越清晰细腻,当然这其中还要受许多因素限制。但是高像素也不一定是好的CCD,其原因就是像素大小(PixelSize),也是很重要的因素,相同数目的像素,排列越密集,像素之间就越容易出现电流干扰,容易出现"噪点"等干扰成像质量的现象出现。由于制造工艺的限制,增加尺寸,成本将会以几何级数提高。

现在大部分厂家的CCD为了提高图像的灵敏度,会使用像素合并的技术,像素合并是一种非常有用的功能,它可被用来提高像素的大小和灵敏度。

5.什么是动态范围值,它如何反映CCD的性能?

动态范围决定着你能否同时在一张胶上同时看到强的信号和弱的信号,而且他们之间能保持比较好的定量关系。一般动态范围采用数量级来表示,这个数越大,表明动态范围越宽。

灰阶表示一种表征光亮度的方法,12bit表示从最暗到最亮等分为212=4096个级别,16bit即分为216个级别,可见bit值越高能分出的细微差别越大。目前来说,市场上主流的凝胶成像的CCD以12bit为主,16bit的仪器一般情况下,分辨率均在200万像素左右,对于真正的16bit,而像素值又近400万的CCD是非常少见的。

简单的说,动态范围表示在一个图像中最亮与最暗的比值。动态范围的值越高CCD性能越好.

凝胶成像仪怎么用

凝胶成像核心参数

CCD相机、镜头光圈、光源、滤光片、暗箱等

凝胶成像应用

总体上来说凝胶成像可应用于:凝胶成像系统可以用于:蛋白质、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分离纯化结果作定性分析

1.分子量定量

对于一般常用的DNA胶片,利用分子量定原由网量功能,通过对胶上DNA Marker条带的已知分子量注释,自动生成拟合曲线,并以它衡量得到未知条带的分子量。通过这种方法所得到的结果较肉眼观察估计要准确很多。

2.密度定量

一般常用的测定DNA(脱氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)浓度的方法是紫外吸收法,但它只能测定样品中的总核苷酸浓度,而不能区分各个长度片段的浓度。利用凝胶成像系统和软件,先将DNA胶片上某一已知其DNA含量的标准条带进行密度标定以后,可以方便的单击其他未知条带,根据与已知条带的密度做比较,可以得到未知DNA的含量。此方法也适用于对PA GE蛋白胶条带的浓度测定。

3.密度扫描

在分子生物学和生物工程研究中,最常用到的是对蛋白表达产物占整个菌体蛋白的百分含量的计算。传统的方法是利用专用的密度扫描,但利用生物分析软件结合现在实验室常规配备的扫描仪或者直接用白光照射的凝胶成像就能完成此项工作。

4.PCR定量

PCR定量主要是指,如果PCR实验扩增出来的条带不是一条,那么可以利用软件计算出各个条带占总体条带的相对百分数。就此功能而言,与密度扫描类似,但实际在原理上并不相同。PCR定量是对选定的几条带进行相对密度定量并计算其占总和的百分数,密度扫描时并对选择区域生成纵向扫描曲线图并积分。

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